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Díaz Gimeno, Patricia
Simón Vallés, Carlos (dir.) Universitat de València. Departament de Pediatria, Obstetrícia i Ginecologia |
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Aquest document és un/a tesi, creat/da en: 2011 | |
El endometrio es la fina capa que recubre el interior del útero. Es un tejido dinámico que varia a lo largo
del ciclo menstrual por la acción cíclica de las hormonas esteroideas. La receptividad endometrial es el fenotipo
que adquiere el endometrio en el que es posible la implantación embrionaria. Este estado se adopta durante un
periodo de tiempo concreto, que transcurre entre los días 19 al 21 del ciclo menstrual, denominado ventana de
implantación. La receptividad endometrial está inducida por una serie de cambios que se evidencian a nivel
tisular, celular y molecular, y evaluarlo es de gran interés clínico en medicina reproductiva para conocer la salud
endometrial de la mujer.
Se han intentado encontrar métodos de evaluación de la receptividad endometrial basados en criterios
morfológicos o en el análisis de un conjunto reducido de moléculas. Pero debido a la naturaleza multifactori...
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El endometrio es la fina capa que recubre el interior del útero. Es un tejido dinámico que varia a lo largo
del ciclo menstrual por la acción cíclica de las hormonas esteroideas. La receptividad endometrial es el fenotipo
que adquiere el endometrio en el que es posible la implantación embrionaria. Este estado se adopta durante un
periodo de tiempo concreto, que transcurre entre los días 19 al 21 del ciclo menstrual, denominado ventana de
implantación. La receptividad endometrial está inducida por una serie de cambios que se evidencian a nivel
tisular, celular y molecular, y evaluarlo es de gran interés clínico en medicina reproductiva para conocer la salud
endometrial de la mujer.
Se han intentado encontrar métodos de evaluación de la receptividad endometrial basados en criterios
morfológicos o en el análisis de un conjunto reducido de moléculas. Pero debido a la naturaleza multifactorial de
la adquisición del fenotipo receptivo no ha sido adecuada ni la profundidad de análisis ni la cantidad de
parámetros considerados. Es por ello que, a causa de la ausencia de un método diagnóstico efectivo de uso
clínico para la receptividad endometrial, se ha ido a la búsqueda del enfoque de las ciencias “ómicas” para
obtener un análisis de gran cantidad de moléculas a la vez.
El objetivo de la presente tesis doctoral fue crear una herramienta molecular capaz de evaluar el estado
de receptividad endometrial "in vivo" a partir de la transcriptómica y de la predicción computacional. La
herramienta molecular estuvo constituida por el diseño de un microarray personalizado de receptividad
endometrial (Endometrial Receptivity Array, ERA) con los genes de interés, y por un predictor. De manera que
con el ERA se registraba el transcriptoma de la receptividad endometrial y con el predictor se distinguían las
muestras tomadas en la fase receptiva del ciclo menstrual como receptivas o como no receptivas. También se
definió la firma trascriptómica de la receptividad endometrial (Endometrial Receptivity Signature, ERS) con los
genes que caracterizaban dicho fenotipo.
Las muestras empleadas fueron biopsias endometriales en las diferentes fases del ciclo menstrual
obtenidas a partir de la población de mujeres del programa de donación de óvulos del Instituto Valenciano de
Infertilidad (IVI). Se utilizaron dos cohortes de muestras distintas: una para la selección de genes que fueron
incluidos en el ERA, y otra para entrenar al predictor para definir el perfil normal de receptividad endometrial y
para caracterizar la ERS.
El ERA quedó constituido por 238 genes, como genes relativos a la receptividad endometrial, que fueron
seleccionados a partir de un análisis de expresión génica diferencial de genoma completo entre muestras prereceptivas
y receptivas. Se seleccionaron aquellos genes diferencialmente expresados con significatividad
estadística (FDR<0,05) y una tasa de cambio de expresión mayor o igual a tres veces (|FC|>3). La ERS quedó
caracterizada por 56 genes que cambiaban su expresión de forma significativa (FDR<0,05) en fase receptiva con
respecto a todas las fases del ciclo menstrual. El predictor se entrenó con los modelos predictivos SVM, KNN y
Random Forest a partir de otra cohorte de muestras tomadas en todas las fases del ciclo menstrual. El resultado
del entrenamiento fue que el predictor era capaz de clasificar las muestras receptivas con una sensibilidad de 1
con el modelo SVM y con una especificidad de 0,90 con el KNN.
Al comparar la herramienta molecular diagnóstica de la receptividad endometrial generada en esta
investigación con el dataje histológico clásico, que ha sido considerado el gold standard para la evaluación
endometrial, se mejoró este dataje tanto en la fase pre-receptiva, como en la post-receptiva, siendo de un 100%
de acierto en la fase receptiva.
La herramienta molecular confiere un método de evaluación objetivo de la receptividad endometrial que
otorga información en la clínica como un parámetro fiable en el tratamiento de la infertilidad.The endometrium is a highly dynamic tissue with the capacity to undergo physiological changes in
response to steroid hormones with the ultimate aim of creating a receptive status called endometrial receptivity
phenotype. This biological process occurs in a synchronized manner with the arrival of the implanting blastocyst
during the window of implantation between days 19 and 21.
The main objetives of this thesis were to create a genomic tool composed of a customized microarray
(Endometrial Receptivity Array [ERA]) and a bioinformatic predictor for endometrial receptivity dating and the other
one was to define the transcriptomic signature (ERS) of human endometrial receptivity.
Two cohorts of endometrial biopsies along the menstrual cycle were used: the first one was to select the
genes to design the customized microarray ERA, and the other one was analyzed by ERA, to train the predictor
for endometrial receptivity dating and to define the transcriptomic signature (ERS).
These samples were obtained from healthy fertile woman from the oocyte donor program (n=99) which
belonged to Instituto Valenciano de Infertilidad (IVI) and they were analyzed in the laboratories of Fundación IVI
(FIVI).
The results obtained were that the ERA included 238 selected genes represented by 569 probes; The
ERS was characterized by 56 genes. The predictor trained by SVM algorithm showed a sensitivity of 1, and it
showed a specificity of 0.90 trained by KNN algorithm. The diagnostic tool improved the classical endometrial
dating in receptive status by showing a 100% of success.
This genomic diagnostic tool is being used clinically in reproductive medicine and gynecology as a reliable
biomarker in assisted reproductive treatments.
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