NAGIOS: RODERIC FUNCIONANDO

Influencia de los factores del donante en el aislamiento y cultivo de hepatocitos humanos

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Influencia de los factores del donante en el aislamiento y cultivo de hepatocitos humanos

dc.contributor.advisor	Pareja Ibars, Eugenia
dc.contributor.advisor	López Andújar, Rafael
dc.contributor.advisor	Gómez-Lechón Moliner, Mª José
dc.contributor.author	Martínez Blasco, Mª Amparo
dc.contributor.other	Departament de Cirurgia	es_ES
dc.date.accessioned	2013-03-02T12:38:31Z
dc.date.available	2013-03-03T07:10:03Z
dc.date.issued	2012
dc.date.submitted	14-12-2012	es_ES
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10550/26258
dc.description.abstract	Liver cell transplantation (HCT) has been and is being studied as a therapy for end-stage liver disease. It can be an alternative to a whole liver transplantation in selected cases such as acute liver failure and certain metabolic diseases. [Mitry et al 2002, Rust et al. 2000] Currently the only effective treatment for end-stage liver disease is liver transplantation [Strom et al. 2003, Mir et al. 2001] Liver transplantation is an established fact in the world. The results are excellent with survival rates at 1 and 5 years of 82% and 66.8% respectively [Rust et al.2000]. However, due to the shortage of organ donors, the waiting list for liver transplantation continues to grow and there is still a number of patients who died in the list that was never transplanted. These patients may benefit from isolated hepatocytes transplantation, which could remedy the shortage of liver function long enough to keep the patient's life until the liver recovers or until a graft from a matched donor. [Mitry et al. 2002, Rust et al. 2000] The clinical applicability of liver cell transplantation has been demonstrated by studies in animal models and in some specific cases of application in humans. The transplantation of isolated hepatocytes in animals has been carried out by various groups over the past decade and in different diseases, as for example: Hypoalbuminemia in Nagase rats. [Lilja et al. 1997, Oren et al. 1999], Wilson's disease in Long-Evans rats and in mice, [Yoshida et al. 1996, Allen et al. 2004]. Crigler-Najjar in rats Gun. [Matas et al. 1976], hypercholesterolemia in Watanabe rabbits suffering from hereditary hyperlipidemia. [Wierdeker et al.1990]. Models of acute liver failure in Lewis rats induced with phenobarbital and carbon tetrachloride (CCL4). [Kobayashi et al. 2000] and F344 rats in which liver failure was induced by D-galactosamine [Gupta et al. 2000]. Just as has been done hepatocyte transplantation in humans: in 7 patients with acute liver failure, 4 with grade IVb encephalopathy, of whom three died in the first 48 hours, and 3 with grade III and IVa of encephalopathy , which had a recovery evident as to the degree of encephalopathy and analytical data (BR, GOT, GPT, TP and blood ammonia). [Habibullah et al. 1994]. Fox et al. in 1998 reported a case of a 10 year old girl affects of Crigler-Najjar syndrome type I. The group of transplanted hepatocytes isolated Strom 7 patients (5 acute liver failure, deficiency of alpha 1-1-1 antitrypsin and ornithine transcarbamylase deficiency). With different results. Bilir et al trasplantaros hepatocytes in 5 patients with acute liver failure (3 viral toxic and 2) in which survival was up to 52 days. A major limitation to the widespread current use of adult human hepatocytes transplantation is the lack of adequate sources of viable human hepatocytes. [Serralta et al. 2003] Pending the development of new technologies that achieve optimal sources of human hepatocytes for cell transplantation, currently they are mainly from reductions or liver transplant grafts invalid. [Mitry et al. 2003] It may be possible to implement the process of isolation of hepatocytes thanks to the modification of process-dependent factors obtaining liver tissue, but remain limiting factors: Unknown donor factors that result in greater profitability hepatocyte isolation procedure. Their identification would allow specific actions to improve the insulation [Mitry et al, 2003]. Steatosis is the main reason for exclusion of grafts for implantation, and is a dramatic decrease in the ability of the enzymatic digestion method for obtaining viable human hepatocytes. No predictive studies of the effectiveness of process isolation and culture of human hepatocytes from adult liver tissue, ie not known what are the ideal characteristics of hepatocyte donors to make a selection of them [Mitry et al , 2004]. Study design: Hepatocyte transplantation may be a valid alternative to whole liver transplantation in certain cases. This would ensure reducing mortality in the waiting list for liver transplantation. Identification of donor-dependent factors which influence the isolation and culture of adult human hepatocytes would allow a better selection of patients donors. HYPOTHESIS: There donor-related characteristics and factors related to the process of obtaining hepatocytes, which influence the isolation and cultivation thereof. OBJECTIVES: The ultimate goal of the study is to obtain viable isolated human hepatocytes for cell transplantation in certain diseases as an alternative to solid organ transplantation. Thus the objectives of the study are: I. Conduct a descriptive and comparative analysis of all variables in a series of patients treated in the Surgery and Liver Transplantation Hepatobiliopancreatic Hospital Universitario La Fe, Valencia and Unit of General Surgery and Gastroenterology, Hospital General Universitario de Valencia from December 1995 to March 2005. Also performed the analysis of all variables in a series of cadaver donors, livers were subsequently implanted in the Surgery and Liver Transplantation Hepatobiliopancreatic Hospital Universitario La Fe, Valencia, from February 2002 to March 2005. The variables were analyzed: a) Clinical characteristics and personal history. b) laboratory features. c) Variables related to intervention in living donors. d) Variables related hepatic extraction process cadaver donors. e) Variables related to the taking of the biopsy. f) Variables related to the isolation of hepatocytes. II. LIVING DONORS: Identifying predictors or independent donors influencing the results of the isolation of hepatocytes: a) Feasibility. b) Performance. c) ECOD d) 6BOHT. III. Cadaver donors: Identification of the predictors or independent donors influencing the results of the isolation of hepatocytes: a) Feasibility. b) Performance. MATERIAL AND METHODS: This is a cross-sectional and retrospective study in which 172 medical records were reviewed for 172 patients. We analyzed two groups: biopsies from living donors (patients operated by different pathologies in elective surgery) and biopsies from cadaver donors. STUDY INCLUSION CRITERIA: Living donors: We included all patients treated in the General Surgery Department of the Hospital General de Valencia and Hepatobiliopancreatic the Surgery and Transplantation, University Hospital La Fe in Valencia by different pathologies in elective surgery from December 1995 to March 2005 it signed the informed consent. Cadaver donors: Obtaining biopsies for processing was performed in all cases by the same surgeon extractor therefore included all cadaveric donors whose hepatic extraction participated in this same surgeon (EPI) from February 2002 to March 2005 and in which cold ischemia time less than 960 minutes (16 hours). STUDY EXCLUSION CRITERIA: Living donors: - Liver cirrhosis. - Not having signed the informed consent. - Poor digestion enzymatic processing biopsy. Cadaver donors: Cirrhotic liver. Poor digestion enzymatic processing biopsy Cold ischemia time exceeding 960 minutes (16 hours). INSULATION hepatocytes: The isolation of hepatocytes was performed by perfusion with collagenase (Gomez-Lechon et al, 1997) medium was used and cultivation base-Williams Ham F12 (1:1) with 1 g / l of BSA (0.1%) for hepatocytes . After performing perfusion of hepatocytes in two stages, centrifuged and the cells are suspended. The study variables were: epidemiological, laboratory and pathological donors, the extraction process (cold ischemia time, type of preservation solution), and the presence of steatosis. The endpoints of the efficiency of the isolation and cultivation of hepatocytes were: 1) Cell viability (percent of live cells as measured by trypan blue staining). 2) The insulation performance (number of cells per gram of tejidox106 obtained). 3) the oxidative capacity of hepatocytes: measuring the 7-O-deetilación etoxicumarin (ECOD) as representative of the overall CYP activity, and testosterone hydroxylation 6-B (6B-OHT) as indicative of CYP3A4 activity, the enzyme more abundant in the human liver, measured in pmol / mg / min. STATISTICAL ANALYSIS: Statistical analysis was performed using SPSS version 15.0. In all cases a p-value less than 0.05 was considered statistically significant. In descriptive statistics, the nonparametric Kolmogorov-Smirnov test was used to verify that the data follow a normal distribution. We performed a descriptive analysis of the characteristics of the separate donor: alive or dead. In comparative statistics: For the analysis of quantitative variables was used Pearson correlation coefficient in the case of normally distributed variables, and the Spearman correlation coefficient in the case of non-normally distributed variables. To analyze the relationship between quantitative variables and qualitative variables was used binary categorical nonparametric Mann-Whitney U-(nonnormal variables) and Student's t parametric test (normal variables). In the event that the qualitative variable had three or more groups was used the nonparametric Kruskal-Wallis test (non-normal variables) and the parametric test analysis of variance (ANOVA) (normal variables). To compare qualitative variables was used Chi Square test (¿2). For multivariate logistic regressions were performed in the case of discrete variables and linear regressions in case you continuous variables. Just as in the univariate analysis, in all cases, a p-value less than 0.05 was considered statistically significant. RESULTS: Discussed in this section a summary of the variables that were significant in univariate and multivariate analysis (Tables 106 and 107). - Variables statistically significant in the univariate analysis of DV and DC. 1: LIVING DONOR: - Viability (%): BMI, Glucose (mg / dL), neutrophils (%) - Feasibility Do 70%: BR Total (mg / dL), BR ¿1 mg / dL - Performance (cells / g x106): GOT (IU / L), Quick Index (%), liver resection (yes / no), liver metastases (YES / NO), warm ischemia (YES / NO), type warm ischemia Warm ischemia time (min), warm ischemia? 30 min. - ECOD activity (pmol / min / mg): Prothrombin time (sec) - Activity testosterone 6-ß-hydroxylase (pmol / min / mg): sex (female), weight (kg), height (cm), BR Total (mg / dL), creatinine (mg / dL), Hb (g / dL), hematocrit (%) ranges GGT (IU / L), hepatic resection (yes / no), liver metastases (YES / NO), sample weight (g) 2. Cadaver donor: - Viability (%): UCI Time (h) Time UCI? 72 h, cold ischemia time (min), cold ischemia time> 700 min, cold ischemia time ranges - Feasibility Do 70%: cold ischemia time (min), fluid infusion (Celsior) - Performance (cells / g x106): Sodium (mEq / L), neutrophils (%), Glucose? 120 mg / dL, cold ischemia time> 700 min, cold ischemia time ranges (min), sample weight - ECOD activity (pmol / min / mg) Potassium (mEq / L), ALP (IU / L), FA ranges (IU / L) - Activity testosterone 6-ß-hydroxylase (pmol / min / mg): Age (years), weight (kg), BMI, previous medication (YES / NO) Variables statistically significant in the multivariate analysis of DV and DC. 1. LIVING DONOR: - Viability (%): BMI - Feasibility Do 70%: BR ¿1 mg / dL, preoperative QT (YES / NO) - Performance (cells / g x106): Quick Index (%), hepatic resection (YES / NO) - ECOD activity (pmol / min / mg): HTO (%), Gender (Male) - Activity testosterone 6-ß-hydroxylase (pmol / min / mg): HTO (%) 2. Cadaver donor: - Viability (%): cold ischemia time (min), fluid infusion (Celsior) - Feasibility Do 70%: cold ischemia time (min), fluid infusion (Celsior) - Performance (cells / g x106): Sodium (mEq / L), neutrophils (%), cold ischemia time (min) CONCLUSIONS: 1. There are large differences between the characteristics of DV and DC. 2. Living donors have higher viability and yield after isolation of hepatocytes cadaver donors. 3. There DV related features that influence the isolation and cultivation of hepatocytes independently: On cell viability: BMI, bilirubin values <1 mg / dL and preoperative chemotherapy. About the performance: the Quick Index and liver resection. About ECOD activity: sex and hematocrit values. Testosterone activity on 6-ß-hydroxylase: hematocrit values. 4. There related features that influence DC isolation and cultivation of hepatocytes independently: On cell viability: cold ischemia time and the perfusion fluid. About the performance: the time of cold ischemia and the perfusion fluid. Based on our results and in response to the study hypothesis, we can say that: RELATED FEATURES ARE GIVING AND RELATED FACTORS gathering process hepatocytes, AFFECTING THE ISOLATION AND CULTURE OF THEM. REFERENCES: 1. R. Mitry and Dhawan A. Hepatocyte transplantation from bench to the bedside. BIMDG Autum bulletin 2002. 2. Rust C. and Gores G. J. Hepatocyte Transplantation in Acute Liver Failure: A New Therapeutic Option for the Next Millenium?. Liver Transplantation 2000; 6:41-43. 3. S. Strom and Fisher R. Hepatocyte transplantation: New possibilities for Therapy. Gastroenterology 2003; 124:568-571. 4. Serralta A., Donato M. T., Orbis F., et al. Functionality of cultured human hepatocytes from elective samples, cadaveric grafts and hepatectomies. In Vitro Toxicology 2003, 17:769-774. 5. Lilja H., N. Arkadopoulos, Blanc, P., et al. Fetal rat hepatocytes: Isolation, characterization and Nagase Analbuminemic transplantation in the rats. Transplantation 1997; 64 :: 1240-1248. 6. Ran Oren, M. Dabeva D., Petkov PM, et alRestoration Levels of serum albumin in rats by Nagase Analbuminemic Hepatocyte Transplantation. Hepatology 1999; 29:75-81 7. N. Kobayashi, M. Ito, J. Nakamura, J. Cai, Gao C., Hammel JM, and Fox IJ Hepatocyte transplantation in rats decompensated cirrhosis whit. Hepatology 2000, 31: 851-857. 8. S. Gupta, P. Rajvanshi, Irani A.N., et al. Integration and proliferation of transplanted cells in hepatic parenchyma Following D-galactosamine-induced acute injury in F344 rats. Journal of Pathology 2000; 190:203-210. 9. H. Nagata, M. Ito, Cai j. Et al. Treatment of cirrhosis and liver failure in rats by hepatocyte xenotransplantation. Gastroenterology 2003; 124:422-431. 10. H. Yoshida, Y. Tokusashi, Lee G. H., Ogawa K. Intrahepatic transplantation of normal hepatocytes prevents it Wilson ¿s disease in Long-Evans cinnamon rats. Gastroenterology 1996. 111:1654-1660. 11. Kobayashy et al. Hepatocyte transplantation in rats with cirrhosis descompensated. 2000.31:851-857 Hepatology. 12. Gupta et al. Integration and proliferation of transplanted cells in hepatic parenchyma Following D-galactosamine-onduced acute injury in F344 rats. Journal of Pathology 2000; 190:203-210. 13. Bilir et al. Hepatocyte transplantation in acute liver failure. Liver transplantation 2000.6:32-40. 14. Strom et al. Transplantation of human hepatocytes. Transplantation Proceedings 1997, 29:2103-2106. 15. Habibullah et al. Human fetal hepatocyte transplantation in patients with fulminant hepatic failure. 1994,58:951-977 Transplantation. 16. Fox et al. Treatment of the Crigler-Najjar syndrome type I with hepatocyte transplantation. The New England Journal of Medicine 1998.338:1422-1426. 17. Sokal et al. Hepatocyte transplantation in a 4-year-old girl with peroxisomal biogenesis disease: technique, safety, and metabolic follow-up. Transplantation 2003. 27:735-738. 18. M. Muraca, Gerunda G., Neri D. et al. Hepatocyte transplantation as a treatment for glycogen storage disease type 1a. Lancet 2002, 359 :317-318. 19. J. Mir Liver transplantation. Generalitat Valenciana ed. 2001. 20. R.R. Mitry, RD Hughes Aw M.M., et al. Human hepatocyte isolation and relationship of cell viability to early graft function. Cell Transplantation 2003; 12:69-74.	en_US
dc.description.abstract	El trasplante celular hepático (TCH) ha sido y sigue siendo objeto de estudio como terapia en el caso de enfermedades hepáticas terminales. Puede ser una alternativa al trasplante de un hígado entero en casos seleccionados como son el fallo hepático agudo y determinadas enfermedades metabólicas. [Mitry et al 2002, Rust et al. 2000] En la actualidad el único tratamiento eficaz para las enfermedades hepáticas en estadio terminal es el trasplante hepático [Strom et al. 2003, Mir et al. 2001] El trasplante de hígado es un hecho consolidado en el mundo entero. Los resultados son excelentes con una supervivencia a 1 y 5 años del 82% y 66.8 % respectivamente [Rust et al.2000]. Sin embargo, debido a la escasez de donantes de órganos, la lista de espera para trasplante hepático continúa creciendo y sigue existiendo un número de pacientes que fallece en dicha lista sin haber llegado a trasplantarse. Estos enfermos podrían beneficiarse del transplante de hepatocitos aislados, que podría suplir el déficit de función hepática durante el tiempo suficiente para mantener la vida del paciente hasta que el hígado se recupere o hasta que llegue un injerto de un donante compatible. [Mitry et al. 2002, Rust et al. 2000] La aplicabilidad clínica del transplante celular hepático se ha demostrado mediante la realización de estudios en modelos animales y en algunos casos puntuales de aplicación en humanos. El trasplante de hepatocitos aislados en animales ha sido llevado a cabo por varios grupos desde hace una década y en diferentes enfermedades, como por ejemplo: Hipoalbuminemia en ratas Nagase.[Lilja et al. 1997, Oren et al. 1999], enfermedad de Wilson en ratas Long-Evans y en ratones, [Yoshida et al. 1996, Allen et al. 2004]. El síndrome de Crigler-Najjar en ratas Gun. [Matas et al. 1976], hipercolesterolemia en conejos Watanabe afectos de hiperlipidemia hereditaria. [Wierdeker et al.1990]. Modelos de fallo hepático agudo en ratas Lewis, inducido con fenobarbital y tetracloruro de carbono (CCL4). [Kobayashi et al. 2000] y ratas F344 en las que el fallo hepático se indujo con D-galactosamina [Gupta et al. 2000]. Del mismo modo se ha realizado el transplante de hepatocitos en humanos: en 7 pacientes con fallo hepático agudo, 4 de ellos con grado IVb de encefalopatía, de los cuales 3 fallecieron en las primeras 48 horas; y 3 con grados III y IVa de encefalopatía, los cuales presentaron una evidente recuperación medida con el grado de encefalopatía y datos analíticos (BR, GOT, GPT, TP y amonio en sangre). [ Habibullah et al. 1994]. Fox et al. en 1998 comunicaron un caso de una niña de 10 años afecta del Síndrome de Crigler- Najjar tipo I. El grupo de Strom trasplantó hepatocitos aislados a 7 pacientes (5 por fallo hepático agudo, 1 por déficit de alfa-1-antitripsina y 1 por déficit de ornitina transcarbamilasa). Con diferentes resultados. Bilir et al trasplantaros hepatocitos a 5 pacientes con fallo hepático agudo (3 tóxico y 2 viral) en los que consiguieron supervivencias de hasta 52 días. Una de las principales limitaciones actuales para la generalización del uso del trasplante de hepatocitos humanos adultos es la falta de fuentes adecuadas de hepatocitos humanos viables. [Serralta et al. 2003] En espera del desarrollo de tecnologías que consigan nuevas fuentes de hepatocitos humanos óptimos para transplante celular, actualmente éstos proceden fundamentalmente de reducciones hepáticas o injertos no válidos para transplante. [Mitry et al. 2003] Es posible que se pueda implementar el proceso de aislamiento de hepatocitos gracias a la modificación de factores dependientes del proceso de obtención de tejido hepático, pero siguen existiendo ciertos factores limitantes: Se desconocen los factores del donante que resultan en una mayor rentabilidad del procedimiento de aislamiento de hepatocitos. Su identificación permitiría acciones específicas encaminadas a mejorar el aislamiento [Mitry et al, 2003]. La esteatosis es el principal motivo de exclusión de los injertos para implante, y supone un descenso drástico en la capacidad del método de digestión enzimática para la obtención de hepatocitos humanos viables. No existen estudios predictivos de la eficacia del proceso de aislamiento y cultivo de hepatocitos humanos a partir de tejido hepático adulto, es decir, no se conocen cuáles son las características ideales de los donantes de hepatocitos para hacer una selección de los mismos [Mitry et al, 2004]. PLANTEAMIENTO DEL ESTUDIO: El trasplante de hepatocitos puede ser una alternativa válida al trasplante de hígado entero en determinados casos. Con ello se conseguiría disminuir la mortalidad en la lista de espera de trasplante hepático. La identificación de factores dependientes del donante que influyan en el aislamiento y cultivo de los hepatocitos humanos adultos permitiría una mejor selección de los pacientes donantes. HIPÓTESIS: Existen características relacionadas con el donante y factores relacionados con el proceso de obtención de los hepatocitos, que influyen en el aislamiento y cultivo de los mismos. OBJETIVOS: El fin último del estudio es la obtención de hepatocitos humanos aislados viables para realizar el trasplante celular en determinadas enfermedades como alternativa al trasplante de órgano sólido. Por tanto los objetivos del estudio son: I. Realizar un análisis descriptivo y comparativo de todas las variables en una serie de pacientes intervenidos en la Unidad de Cirugía Hepatobiliopancreática y Trasplante Hepático del Hospital Universitario La Fe de Valencia y en la Unidad de Cirugía General y Aparato Digestivo del Hospital General Universitario de Valencia desde diciembre de 1995 hasta marzo de 2005. Así mismo se realizó el análisis de todas las variables de una serie de donantes cadáver, de hígados que posteriormente fueron implantados, en la Unidad de Cirugía Hepatobiliopancreática y Trasplante Hepático del Hospital Universitario La Fe de Valencia, desde febrero de 2002 hasta marzo de 2005. Las variables a analizar fueron: a) Características clínicas y antecedentes personales. b) Características de laboratorio. c) Variables relacionadas con la intervención en los donantes vivos. d) Variables relacionadas con el proceso de extracción hepática en los donantes cadáver. e) Variables relacionadas con la toma de la biopsia. f) Variables relacionadas con el aislamiento de hepatocitos. II. DONANTES VIVOS: Identificación de las variables predictoras o independientes de los donantes que influyen en los resultados del aislamiento de los hepatocitos: a) Viabilidad. b) Rendimiento. c) ECOD d) 6BOHT. III. DONANTES CADÁVER: Identificación de las variables predictoras o independientes de los donantes que influyen en los resultados del aislamiento de los hepatocitos: a) Viabilidad. b) Rendimiento. MATERIAL Y MÉTODOS: Se trata de un estudio transversal, observacional y retrospectivo en el que se revisaron 172 historias clínicas correspondientes a 172 pacientes. Se analizaron dos grupos: biopsias procedentes de donantes vivos (pacientes intervenidos por diferentes patologías en cirugía programada) y biopsias procedentes de donantes cadáver. CRITERIOS DE INCLUSIÓN DEL ESTUDIO: Donantes vivos: Se incluyeron todos los pacientes intervenidos en el Servicio de Cirugía General del Hospital General de Valencia y en la Unidad de Cirugía Hepatobiliopancreática y Trasplante del Hospital Universitario La Fe de Valencia por diferentes patologías en cirugía programada desde diciembre de 1995 hasta marzo de 2005 que firmaron el consentimiento informado. Donantes cadáver: La obtención de biopsias para su procesamiento se realizó en todos los casos por el mismo cirujano extractor, por tanto se incluyeron todos los donantes cadáver en cuya extracción hepática participó este mismo cirujano (E.P.I) desde febrero de 2002 hasta marzo de 2005 y en los que el tiempo de isquemia fría menor a 960 minutos (16 horas). CRITERIOS DE EXCLUSIÓN DEL ESTUDIO: Donantes vivos: - Hígado cirrótico. - No haber firmado el consentimiento informado. - Mala digestión enzimática de la biopsia en el procesamiento. Donantes cadáver: Hígado cirrótico. Mala digestión enzimática de la biopsia en el procesamiento Tiempo de isquemia fría superior a 960 minutos (16 horas). AISLAMIENTO DE LOS HEPATOCITOS: El aislamiento de los hepatocitos se realizó mediante perfusión con colagenasa (Gómez-Lechón et al, 1997) y se utilizó el medio base de cultivo Ham F12-Williams(1:1) con 1 gr/l de BSA (0.1%) para hepatocitos. Tras realizar la perfusión de los hepatocitos en dos etapas, se centrifuga y se suspenden las células. Las variables a estudio fueron: epidemiológicas, analíticas y anatomopatológicas de los donantes; del proceso de extracción (tiempo de isquemia fría, tipo de líquido de preservación); así como la presencia de esteatosis. Las variables de valoración de la eficacia del procedimiento de aislamiento y cultivo de los hepatocitos fueron: 1) La viabilidad celular (porcentaje de células vivas, medida mediante tinción con azul tripan). 2) El rendimiento del aislamiento (número de células obtenidas por gramo de tejidox106). 3) La capacidad oxidativa de los hepatocitos: midiendo la 7-etoxicumarin O-deetilación (ECOD) como representativa de la actividad CYP total, y la testosterona 6-B hidroxilación (6B-OHT) como indicativa de la actividad CYP3A4, la enzima más abundante en el hígado humano, medidas en pmol/mg/min. ANÁLISIS ESTADÍSTICO: El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS versión 15.0. En todos los casos un p-valor menor que 0.05 fue considerado estadísticamente significativo. En la estadística descriptiva, la prueba no paramétrica de Kolmogórov-Smirnov se empleó para verificar que los datos seguían una distribución Normal. Se efectuó un análisis descriptivo de las características de los donantes por separado: vivos o cadáveres. En la estadística comparativa: Para el análisis de dos variables cuantitativas se empleó el coeficiente de correlación de Pearson en el caso de las variables de distribución normal y el coeficiente de correlación de Spearman en el caso de las variables de distribución no normal. Para analizar la relación entre variables cuantitativas y variables cualitativas categóricas binarias se empleó la prueba no paramétrica de U-Mann-Whitney (variables no normales) y la prueba paramétrica t de Student (variables normales). En el caso de que la variable cualitativa tuviera tres o más grupos se empleó la prueba no paramétrica Kruskal-Wallis (variables no normales) y la prueba paramétrica análisis de la varianza (ANOVA) (variables normales). Para comparar variables cualitativas se ha empleado la prueba Chi Cuadrado (¿2). Para el análisis multivariante se realizaron regresiones logísticas en el caso de variables discretas y regresiones lineales en le caso de variables cuantitativas continuas. Del mismo modo que en el análisis univariante, en todos los casos, un p-valor menor que 0.05 fue considerado estadísticamente significativo. RESULTADOS: Se expone en este apartado un resumen de las variables que han sido significativas en el análisis univariante y multivariante (Tablas 106 y 107). - Variables estadísticamente significativas en el análisis univariante de los DV y DC. 1: DONANTE VIVO: - Viabilidad (%): IMC, Glucosa (mg/dL), Neutrófilos (%) - Viabilidad ¿70%: BR Total (mg/dL), BR¿1 mg/dL - Rendimiento (cel/g x106): GOT (UI/L), Índice Quick (%), Resección Hepática (SI/NO), Metástasis Hepáticas (SI/NO), Isquemia caliente (SI/NO), Tipo isquemia caliente, Tiempo isquemia caliente (min), Isquemia caliente ¿30 min. - Actividad ECOD (pmol/min/mg): Tiempo Protrombina (seg) - Actividad testosterona-6-ß hidroxilasa (pmol/min/mg): Sexo (Mujer), Peso (Kg), Talla (cm), BR Total (mg/dL), Creatinina (mg/dL), Hb (g/dL), HTO (%), GGT Rangos (UI/L), Resección hepática (SI/NO), Metástasis hepáticas (SI/NO), Peso muestra (g) 2. DONANTE CADÁVER: - Viabilidad (%): Tiempo UCI (h), Tiempo UCI¿ 72 h, Tiempo isquemia fría (min), Tiempo isquemia fría >700 min, Tiempo isquemia fría Rangos - Viabilidad ¿70%: Tiempo isquemia fría (min), Líquido perfusión (Celsior) - Rendimiento (cel/g x106): Sodio (mEq/L), Neutrófilos (%), Glucosa¿ 120 mg/dL, Tiempo isquemia fría >700 min, Tiempo isquemia fría Rangos (min), Peso muestra - Actividad ECOD (pmol/min/mg): Potasio (mEq/L), FA (UI/L), FA Rangos (UI/L) - Actividad testosterona-6-ß hidroxilasa (pmol/min/mg): Edad (años), Peso (Kg), IMC, Medicación previa (SI/NO) Variables estadísticamente significativas en el análisis multivariante de los DV y DC. 1. DONANTE VIVO: - Viabilidad (%): IMC - Viabilidad ¿70%: BR¿1 mg/dL, QT preoperatoria (SI/NO) - Rendimiento (cel/g x106): Índice de Quick (%), Resección hepática (SI/NO) - Actividad ECOD (pmol/min/mg): HTO (%) , Sexo (Hombre) - Actividad testosterona-6-ß hidroxilasa (pmol/min/mg): HTO (%) 2. DONANTE CADÁVER: - Viabilidad (%): Tiempo isquemia fría (min), Líquido perfusión (Celsior) - Viabilidad ¿70%: Tiempo isquemia fría (min), Líquido perfusión (Celsior) - Rendimiento (cel/g x106): Sodio (mEq/L), Neutrófilos (%), Tiempo isquemia fría (min) CONCLUSIONES: 1. Existen grandes diferencias entre las características de los DV y DC. 2. Los donantes vivos presentan mayor viabilidad y rendimiento tras el asilamiento de hepatocitos que los donantes cadáver. 3. Existen características relacionadas con el DV que influyen en el aislamiento y cultivo de hepatocitos de forma independiente: Sobre la viabilidad celular: el IMC, los valores de bilirrubina <1 mg/dL y la quimioterapia preoperatoria,. Sobre el rendimiento: el Índice de Quick y la resección hepática. Sobre la actividad ECOD: el sexo y los valores de hematocrito. Sobre la actividad Testosterona-6-ß hidroxilasa: los valores de hematocrito. 4. Existen características relacionadas con el DC que influyen en el aislamiento y cultivo de hepatocitos de forma independiente: Sobre la viabilidad celular: el tiempo de isquemia fría y el líquido de perfusión. Sobre el rendimiento: el tiempo de isquemia fría y el líquido de perfusión. En base a nuestros resultados y en respuesta a la hipótesis planteada en el estudio, podemos afirmar que: EXISTEN CARACTERÍSTICAS RELACIONADAS CON EL DONANTE Y FACTORES RELACIONADOS CON EL PROCESO DE OBTENCIÓN DE LOS HEPATOCITOS, QUE INFLUYEN EN EL AISLAMIENTO Y CULTIVO DE LOS MISMOS. BIBLIOGRAFÍA: 1. Mitry R. and Dhawan A. Hepatocyte transplantation from bench to the bedside. BIMDG bulletin Autum 2002. 2. Rust C. and Gores G.J. Hepatocyte transplantation in Acute Liver Failure: A New Therapeutic Option for the Next Millenium?. Liver Transplantation 2000;6:41-43. 3. Strom S. and Fisher R. Hepatocyte transplantation: New possibilities for Therapy. Gastroenterology 2003;124:568-571. 4. 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dc.format.extent	224 p.	es_ES
dc.language.iso	es	es_ES
dc.subject	aislamiento	es_ES
dc.subject	cultivo	es_ES
dc.subject	hepatocitos	es_ES
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dc.title	Influencia de los factores del donante en el aislamiento y cultivo de hepatocitos humanos	es_ES
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dc.subject.unesco	UNESCO::CIENCIAS MÉDICAS	es_ES
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