NAGIOS: RODERIC FUNCIONANDO

Valor de las subpoblaciones de las células natural killer y del receptor de citotoxicidad natural NKp44 como biomarcadores de malignidad en derrames pleurales

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Valor de las subpoblaciones de las células natural killer y del receptor de citotoxicidad natural NKp44 como biomarcadores de malignidad en derrames pleurales

dc.contributor.advisor	Fernández Fabrellas, Estrella
dc.contributor.advisor	Juan Samper, Gustavo
dc.contributor.advisor	Morales Suárez-Varela, María M.
dc.contributor.author	Herrera Lara, Susana
dc.contributor.other	Departament de Medicina	es_ES
dc.date.accessioned	2016-02-05T12:28:30Z
dc.date.available	2017-02-05T05:45:07Z
dc.date.issued	2015	es_ES
dc.date.submitted	09-02-2016	es_ES
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10550/50738
dc.description.abstract	Malignant pleural effusion is a common clinical problem in patients with neoplastic disease and its appearance is a sign of advanced disease because it implies the involvement of the pleural space by said malignancy. Flow cytometry is a technique that enables fast, accurate and reproducible analysis of pleural fluid cells and can complement cytology in the study of suspected malignant pleural effusions. NK cells are the first line of tumor defense, so that the determination of subpopulations of NK, especially those cytotoxic function (NK CD56dim CD16- NK CD56 dim CD16 +, NK CD16 + and NK CD57 +) in spills Pleural could help establish both the neoplastic nature of the spill and the prognosis of patients with malignant pleural effusion. Among the receptors responsible for the activation of NK cells include the CD16, responsible for antibody dependent cytotoxicity, and NKp44 which selectively expressed the activation of NK cells. Therefore, recognition of activated NK cells with the expression of these receptors could orient about the response having NK against tumor cells in pleural effusions. Our assumption therefore is that the study of different cellular phenotypes present in the pleural fluid determined by flow cytometry, especially the study of NK cells, and its subpopulations as NKp44 receptor expression cell activity aid the diagnosis of malignant pleural effusion and could be a determining factor in his prognosis. Main aims: 1. Set the utility to quantify lymphocyte populations, especially the NK cells in pleural effusions of unknown etiology as a possible indicator of malignancy (differentiating between malignant and benign). 2. Evaluate the role of NK subpopulations, mainly those with cytotoxic function (NK CD56dim CD16-, CD16 + CD56 dim NK, NK CD16 + and CD57 + NK) in the diagnosis of malignant pleural effusion. 3. Study the contribution to the diagnosis of malignant pleural effusion pleural fluid analysis ratio / peripheral blood (LP / SP), commonly used in the study of pleural effusions, NK populations. 4. Analyze the NKp44 could have value as a biomarker of malignant pleural effusion. Secondary objectives: 1. Assess whether the study of NK subpopulation of NKp44 receptor and influence the prognosis of patients with malignant pleural effusion. 2. Assess whether the study of pleural fluid cellularity combined with clinical, radiological and laboratory variables could also be useful to help establish the diagnosis and / or prognosis of pleural effusion. Material and methods: This is a prospective observational cohort study of two years including patients with pleural effusion of unknown etiology that will undergo a diagnostic thoracentesis procedure as a routine included in the patient management. There has been a quantification percentage of lymphocyte subsets in peripheral blood and pleural fluid on 100% of total cells by flow cytometry, also have been counted percentages to total NK NK subpopulations using markers antigens surface CD3, CD56, CD16 and CD57 and natural cytotoxicity receptor NKp44 (CD336). Among other results were obtained: - The isolated determination of the percentage of NK cells and / or their subpopulations in pleural fluid from pleural effusions of unknown etiology can not differentiate between malignant and benign. - The natural cytotoxicity receptor NKp44, specific to the activated NK cell does not add value to the diagnosis and prognosis of patients with pleural effusion, nor whether it is malignant. - The LP / SP ratio of CD56 bright NK NK CD16- and CD56 dim CD16 -, regulatory and cytotoxic populations respectively have an acceptable diagnostic ability to discriminate malignant pleural effusion or benign paramalignant. - The best predictor of mortality in patients with malignant pleural effusion factor is the LP / SP ratio of CD16 + NK subpopulation (HR 6.1). Material and methods: This is a prospective observational cohort study of two years including patients with pleural effusion of unknown etiology that will undergo a diagnostic thoracentesis procedure as a routine included in the patient management. There has been a quantification percentage of lymphocyte subsets in peripheral blood and pleural fluid on 100% of total cells by flow cytometry, also have been counted percentages to total NK NK subpopulations using markers antigens surface CD3, CD56, CD16 and CD57 and natural cytotoxicity receptor NKp44 (CD336). Among other results were obtained: - The isolated determination of the percentage of NK cells and / or their subpopulations in pleural fluid from pleural effusions of unknown etiology can not differentiate between malignant and benign. - The natural cytotoxicity receptor NKp44, specific to the activated NK cell does not add value to the diagnosis and prognosis of patients with pleural effusion, nor whether it is malignant. - The LP / SP ratio of CD56 bright NK NK CD16- and CD56 dim CD16 -, regulatory and cytotoxic populations respectively have an acceptable diagnostic ability to discriminate malignant pleural effusion or benign paramalignant. - The best predictor of mortality in patients with malignant pleural effusion factor is the LP / SP ratio of CD16 + NK subpopulation (HR 6.1). - Are the clinical findings (asthenia), radiological (lung mass on CT) and LP / SP NK subpopulation ratio of CD16 dim CD56 + (cytotoxic) ≤ 0.43, variables that influence to establish the prognosis of pleural effusion of unknown etiology. Conclusions: 1. The isolated determination of the percentage of NK cells in pleural fluid from pleural effusions of unknown etiology can not differentiate between malignant and benign. Neither sub-population including those with cytotoxic function. 2. The isolated determination of the percentage in peripheral blood subpopulations NK CD56 dim CD16 + and NK CD16 + cytotoxic function and antibody-dependent, is a diagnostic test with an acceptable ability to discriminate a patient with malignant pleural effusion of benign, suggesting a systemic response to the tumor rather than a local response. 3. The LP / SP ratio of CD56 bright NK CD56 dim NK CD16- and CD16 - populations of regulatory and cytotoxic NK respectively without expression of CD16 surface antigen responsible for antibody-dependent cytotoxicity, are acceptable diagnostic ability to discriminate a malignant pleural effusion or benign paramalignant. 4. The natural cytotoxicity receptor NKp44, specific to the activated NK cell does not add value to the diagnosis or prognosis in patients with pleural effusion, not in malignant pleural effusion. 5. The best predictor of mortality in patients with malignant pleural effusion is the LP / SP ratio of CD16 + NK subpopulation (antibody dependent cytotoxic) increasing the risk of death 6.1 times. 6. The combination of clinical, radiological and biochemical pleural fluid can help confirm the diagnosis of malignant pleural effusion. The analysis of the pleural cellularity does not increase the possibility of a diagnosis of malignancy in the decision tree. 7. In terms of prognosis, are clinical findings (asthenia), radiological (lung mass) and a decrease in the ratio LP / SP NK subpopulation of CD56 dim CD16 + (cytotoxic), variables that influence to establish the forecast pleural effusion.	en_US
dc.description.abstract	El derrame pleural maligno es un problema clínico común en los pacientes con enfermedad neoplásica y su aparición es un signo de enfermedad avanzada ya que implica la afectación del espacio pleural por parte de dicho proceso maligno. La citometría de flujo es una técnica que permite un análisis rápido, preciso y reproducible de las células del líquido pleural, pudiendo complementar a la citología en el estudio de los derrames pleurales sospechosos de malignidad. Las células NK están en la primera línea de defensa tumoral, por lo que la determinación de las subpoblaciones de NK, especialmente las que tienen función citotóxica (NK CD56dim CD16-, NK CD56 dim CD16+, NK CD16+ y NK CD57+), en los derrames pleurales podría ayudar a establecer tanto la naturaleza neoplásica del derrame como el pronóstico de los pacientes con derrame pleural maligno. Entre los receptores responsables de la activación de las células NK destacan el CD16, responsable de la citotoxicidad dependiente de anticuerpo, y el NKp44 que expresa selectivamente la activación de las células NK. Por ello, el reconocimiento de las células NK activadas con la expresión de estos receptores podría orientarnos sobre la respuesta que tienen las NK frente a las células tumorales presentes en los derrames pleurales. Nuestra hipótesis, por tanto, es que el estudio de los diferentes fenotipos celulares presentes en el líquido pleural determinados mediante citometría de flujo, especialmente el estudio de las células NK, sus subpoblaciones y el receptor NKp44 como expresión de actividad celular, ayudaría al diagnóstico del derrame pleural maligno y podría ser un factor determinante en su pronóstico. Objetivos principales: 1. Establecer la utilidad de cuantificar las poblaciones linfocitarias, especialmente las células NK, en los derrames pleurales de etiología desconocida como posible indicador de malignidad (diferenciar entre malignos y benignos). 2. Evaluar el papel de las subpoblaciones de NK, principalmente las que tienen función citotóxica (NK CD56dim CD16-, NK CD56 dim CD16+, NK CD16+ y NK CD57+), en el diagnóstico del derrame pleural maligno. 3. Estudiar la aportación al diagnóstico de derrame pleural maligno del análisis de la ratio líquido pleural/sangre periférica (LP/SP), empleada habitualmente en el estudio de los derrames pleurales, de las poblaciones de NK. 4. Analizar el valor que NKp44 pudiera tener como biomarcador de malignidad del derrame pleural. Objetivos secundarios: 1. Evaluar si el estudio de NK, sus subpoblaciones y el del receptor NKp44 influyen en el pronóstico del paciente con derrame pleural maligno. 2. Evaluar si el estudio de la celularidad del líquido pleural combinado con las variables clínicas, radiológicas y analíticas también podría ser útil para ayudar a establecer el diagnóstico y/o pronóstico del derrame pleural. Material y Métodos: Se trata de un estudio cohorte observacional prospectivo de dos años de duración incluyendo pacientes que tienen derrame pleural de etiología desconocida que van a ser sometidos a una toracocentesis diagnóstica como un procedimiento incluido en el manejo habitual del paciente. Se ha realizado una cuantificación porcentual de las poblaciones linfocitarias en líquido pleural y sangre periférica respecto al 100% de los linfocitos totales mediante citometría de flujo, también se han contabilizado los porcentajes respecto a las NK totales de las subpoblaciones de NK utilizando los marcadores de antígenos de superficie CD3, CD56, CD16 y CD57 así como del receptor de citotoxicidad natural NKp44 (CD336). Entre otros resultados se han obtenido: - La determinación aislada del porcentaje de células NK y/o de sus subpoblaciones en líquido pleural de los derrames pleurales de etiología desconocida no permite diferenciar entre malignos y benignos. - El receptor de citotoxicidad natural NKp44, específico de la célula NK activada, no aporta valor al diagnóstico ni al pronóstico de los pacientes con derrame pleural, tampoco si es maligno. - La ratio LP/SP de las NK CD56 bright CD16- y NK CD56 dim CD16 -, poblaciones reguladoras y citotóxicas respectivamente, tienen una capacidad diagnóstica aceptable para discriminar un derrame pleural maligno o paramaligno del benigno. - El mejor factor pronóstico de mortalidad en los pacientes con derrame pleural maligno es la ratio LP/SP de la subpoblación NK CD16+ (HR 6,1). - Son los hallazgos clínicos (astenia), radiológicos (masa pulmonar en el TAC) y una ratio LP/SP de la subpoblación NK CD56 dim CD16+ (citotóxica) ≤ 0,43, las variables que más influyen para establecer el pronóstico del derrame pleural de etiología desconocida. Conclusiones: 1. La determinación aislada del porcentaje de células NK en líquido pleural de los derrames pleurales de etiología desconocida no permite diferenciar entre malignos y benignos. Tampoco la de sus subpoblaciones incluyendo las que tienen función citotóxica. 2. La determinación aislada del porcentaje en sangre periférica de las subpoblaciones NK CD56 dim CD16+ y NK CD16+, con función citotóxica dependiente de anticuerpo, es un test diagnóstico con una capacidad aceptable para discriminar un paciente con derrame pleural maligno de benigno, lo que sugiere una respuesta sistémica al tumor más que una respuesta local. 3. La ratio LP/SP de las NK CD56 bright CD16- y NK CD56 dim CD16 -, poblaciones de NK reguladora y citotóxica respectivamente sin expresión del antígeno de superficie CD16 responsable de la citotoxicidad dependiente de anticuerpo, tienen una capacidad diagnóstica aceptable para discriminar un derrame pleural maligno o paramaligno del benigno. 4. El receptor de citotoxicidad natural NKp44, específico de la célula NK activada, no aporta valor al diagnóstico ni al pronóstico en los pacientes con derrame pleural, tampoco en el derrame pleural maligno. 5. El mejor factor pronóstico de mortalidad en los pacientes con derrame pleural maligno es la ratio LP/SP de la subpoblación NK CD16+ (citotóxica dependiente de anticuerpo) incrementando el riesgo de muerte 6,1 veces. 6. La combinación de los hallazgos clínicos, radiológicos y de bioquímica del líquido pleural ayudan a establecer el diagnóstico de malignidad del derrame pleural. El análisis de la celularidad pleural no incrementa la posibilidad de un diagnóstico de malignidad en el árbol de decisión. 7. En cuanto al pronóstico, son los hallazgos clínicos (astenia), radiológicos (masa pulmonar) y una disminución de la ratio LP/SP de la subpoblación NK CD56 dim CD16+ (citotóxica), las variables que más influyen para establecer el pronóstico del derrame pleural.	es_ES
dc.format.extent	191 p.	es_ES
dc.language.iso	es	es_ES
dc.subject	oncologia	es_ES
dc.subject	inmunología	es_ES
dc.subject	enfermedades pulmonares	es_ES
dc.title	Valor de las subpoblaciones de las células natural killer y del receptor de citotoxicidad natural NKp44 como biomarcadores de malignidad en derrames pleurales	es_ES
dc.type	doctoral thesis	es_ES
dc.subject.unesco	UNESCO::CIENCIAS MÉDICAS	es_ES
dc.embargo.terms	1 year	es_ES