NAGIOS: RODERIC FUNCIONANDO

Análisis del perfil de expresión de microRNAs en tejido embrionario sano y ectópico

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Análisis del perfil de expresión de microRNAs en tejido embrionario sano y ectópico

dc.contributor.advisor	Domínguez Hernández, Francisco
dc.contributor.advisor	Pellicer Martínez, Antonio
dc.contributor.advisor	Perales Marín, Alfredo
dc.contributor.author	Lozoya Araque, Teresa
dc.contributor.other	Departament de Pediatria, Obstetrícia i Ginecologia	es_ES
dc.date.accessioned	2017-01-09T12:11:47Z
dc.date.available	2017-01-10T05:45:07Z
dc.date.issued	2016	es_ES
dc.date.submitted	13-12-2016	es_ES
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10550/56690
dc.description.abstract	Placentation is a fundamental process in the success of reproduction, with a strict regulation where the trophoblast has an important role. This process is properly performed because of the strictly regulated relationship between maternal and fetal tissues, where a multitude of molecules and receptors intervene; therefore, a proper development of this process is necessary to ensure a healthy pregnancy at term, and the anomalous invasion of the trophoblast will lead to a large range of complications, including ectopic pregnancy. The placentation process is altered in ectopic gestations, with an implantation outside the endometrial cavity. Alterations in this process may be cause or consequence of different tissue markers with different expression patterns in ectopic gestations, unlike the evolutionary gestations, which could modify the fundamental pathways involved in the regulation of the process and the correct placentation and implantation. On the other hand, microRNAs are molecules with great regulatory capacity of multiple dianas and multitude of biological processes; in addition, some preliminary studies of microRNA expression profiles in human tissue using microarrays identify microRNAs selectively expressed in placental tissue. Our hypothesis is, since there are different mechanisms that would play a role in the process of regulating the placentation of ectopic pregnancies in relation to normal pregnancies, there would be a pattern of expression of differential microRNAs between both gestations, and the analysis of such expression profile in both types of pregnancy in the same stages of gestation could provide us new knowledge and help us to know the mechanisms involved in the pathophysiology of ectopic gestation in humans. Our objective was to investigate the microRNA profile of embryonic tissues in ectopic pregnancies and controlled abortions (voluntary termination of pregnancy). Twenty-three patients suffering from tubal ectopic pregnancies and twenty-nine patients with a normal ongoing pregnancy scheduled for a voluntary termination of pregnancy were recruited. Embryonic tissue samples were analyzed by microRNAs microarray and further validated by real time PCR. Microarray studies showed that four microRNAs were differentially downregulated (hsa-mir-196b, hsa-mir-30a, hsa-mir-873, and hsa-mir-337-3p) and three upregulated (hsa-mir-1288, hsa-mir-451, and hsa-mir-223) in ectopic pregnancies compared to control tissue samples. Hsa-miR-196, hsa-miR-223, and hsa-miR-451 were further validated by real time PCR in a wider population of ectopic pregnancies and control samples. We also performed a computational analysis to identify the gene targets and pathways which might be modulated by these three differentially expressed microRNAs. The most significant pathways found were the mucin type O-glycan biosynthesis and the ECM-receptor-interaction pathways. We also checked that the dysregulation of these three microRNAs was able to alter the expression of the gene targets in the embryonic tissues included in these pathways such as GALNT13 and ITGA2 genes. In conclusion, analysis of microRNAs in ectopic and eutopic embryonic tissues shows different expression patterns that could modify pathways which are critical for correct implantation, providing new insights into the understanding of ectopic implantation in humans.	en_US
dc.description.abstract	La placentación es un proceso fundamental en el éxito de la reproducción, sometido a una estrecha regulación donde el trofoblasto juega una función clave. Este proceso se realiza adecuadamente gracias a la relación estrictamente regulada entre los tejidos materno-fetales, donde intervienen multitud de moléculas y receptores; por tanto es necesario un correcto desarrollo de dicho proceso para asegurar una gestación a término saludable, y la invasión anómala del trofoblasto conducirá a un gran abanico de complicaciones, entre ellas el embarazo ectópico. El proceso de placentación está alterado en las gestaciones ectópicas, produciéndose la implantación fuera de la cavidad endometrial. Las alteraciones en este proceso pueden ser origen o debidas a la aparición de diferentes marcadores tisulares con distintos patrones de expresión en las gestaciones ectópicas, a diferencia de las gestaciones evolutivas, que podrían modificar las vías fundamentales que intervienen en la regulación del proceso y la correcta placentación e implantación. Por otro lado, los microRNAs son moléculas con gran capacidad reguladora de múltiples dianas y multitud de procesos biológicos; además, algunos estudios preliminares de perfiles de expresión de microRNAs en tejido humano mediante microarrays identifican microRNAs selectivamente expresados en tejido placentario. Nuestra hipótesis por tanto plantearía que, dado que existen distintos mecanismos que jugarían un papel en el proceso de regulación de la placentación de los embarazos ectópicos respecto de gestaciones normales evolutivas, existiría un patrón de expresión de microRNAs diferencial entre ambas gestaciones, con lo que el análisis de tal perfil de expresión en ambos tipos de embarazo en las mismas etapas de la gestación podría proporcionarnos nuevos conocimientos y ayudarnos a conocer los mecanismos implicados en la fisiopatología de la gestación ectópica en el ser humano. Nuestro objetivo fue investigar el perfil global de expresión de microRNAs en tejido embrionario procedente de embarazos ectópicos y de interrupciones voluntarias del embarazo. 23 pacientes con embarazo ectópico tubárico y 29 pacientes con interrupción voluntaria del embarazo fueron reclutados. Las muestras de tejido embrionario fueron analizadas por microarrays de microRNA y los resultados obtenidos fueron validados por PCR en tiempo real. Los estudios de microarrays mostraron que cuatro microRNAs mostraron unos niveles de expresión diferencialmente disminuidos (hsa-mir-196b, hsa-mir-30a, hsa-mir-873 y hsa-mir-337-3p) y tres microRNAs mostraron unos niveles de expresión aumentados (hsa-mir-1288, hsa-mir -451, y hsa-mir-223) en muestras procedentes de tejido ectópico comparado con muestras procedentes de tejido control. Hsa-miR-196, hsa-miR-223 y hsa-miR-451 fueron posteriormente validados por PCR en tiempo real en una población más amplia de pacientes compuesta por 15 muestras procedentes de embarazos ectópicos y 21 muestras control. También se realizó un análisis computacional para identificar los genes diana y las vías de señalización que podrían ser moduladas por estos microRNAs diferencialmente expresados. Las vías más significativas encontradas fueron la biosíntesis de O-glicano de tipo mucina y las vías de interacción del receptor de la matriz extracelular. También se comprobó que la desregulación de estos tres microRNAs fue capaz de alterar la expresión de los genes dianas en los tejidos embrionarios incluidos en estas vías (como los genes GALNT13 e ITGA2). En conclusión, el análisis de del perfil de expresión de microRNAs en tejido embrionario procedente de embarazos ectópicos y eutópicos mostró diferentes patrones de expresión que podrían modificar vías de señalización y genes diana que son críticos para la correcta implantación implantación del blastocisto, ayudando a comprender y proporcionando nuevos conocimientos sobre la implantación ectópica en los seres humanos.	es_ES
dc.format.extent	98 p.	es_ES
dc.language.iso	es	es_ES
dc.subject	microRNA	es_ES
dc.subject	embarazo ectópico	es_ES
dc.subject	implantación embrionaria	es_ES
dc.title	Análisis del perfil de expresión de microRNAs en tejido embrionario sano y ectópico	es_ES
dc.type	doctoral thesis	es_ES
dc.subject.unesco	UNESCO::CIENCIAS MÉDICAS	es_ES
dc.embargo.terms	0 days	es_ES