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Papel de hemo oxigensa-1 en la artritis inducida por transferencia de suero K/BxN. Caracterización del modelo experimental

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Papel de hemo oxigensa-1 en la artritis inducida por transferencia de suero K/BxN. Caracterización del modelo experimental

dc.contributor.advisor	Alcaraz Tormo, María José
dc.contributor.advisor	Ferrándiz Manglano, María Luisa
dc.contributor.author	Brines Juan, Rita
dc.contributor.other	Departament de Farmacologia	es_ES
dc.date.accessioned	2017-05-25T11:53:05Z
dc.date.available	2017-05-26T04:45:06Z
dc.date.issued	2017	es_ES
dc.date.submitted	02-06-2017	es_ES
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10550/58649
dc.description.abstract	La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad sistémica, crónica y de carácter autoinmune que produce daño articular en los pacientes. Cursa con la degradación del hueso subcondral y del cartílago articular causando un gran dolor; además de ser una enfermedad incapacitante, puede provocar síntomas extraarticulares que afecten a otros órganos. El estudio de la patogenia y del tratamiento de la AR se desarrolla en gran medida sobre modelos animales de artritis experimental. En la actualidad existen varios modelos de artritis en ratón ampliamente utilizados como son el modelo de Artritis Inducida por Colágeno (CIA) y el modelo por transferencia de suero K/BxN. Aunque ambos son de gran utilidad, poseen algunas limitaciones. En el caso del modelo de CIA, produce un proceso artrítico muy llamativo en los ratones DBA1/J, sin embargo, no es tan reproducible en otras cepas de ratón como C57BL/6, que es la cepa más utilizada para ensayos de modificación genética. Por otro lado, el modelo de artritis por transferencia de suero K/BxN es muy útil en el estudio de la fase efectora de la AR, pero no permite analizar la fase más tardía de la enfermedad. En la primera parte de esta tesis, se ha realizado un estudio para adaptar el modelo de artritis por transferencia de suero K/BxN a un modelo cronificado. Esto nos permite estudiar las características fisiopatológicas de este proceso en su fase más tardía en ratones wild type y en ratones modificados genéticamente, así como analizar distintas dianas terapéuticas para el tratamiento de la enfermedad. La adaptación de este modelo se realizó ampliando el modelo inicial, consistente en dos inmunizaciones con suero proveniente de ratones espontáneamente artríticos, pasando a realizar cinco inmunizaciones periódicas. Con esto conseguimos mantener elevados los mediadores inflamatorios propios de dicha enfermedad y los signos característicos del proceso artrítico mimetizando la patogenia de la AR. En la segunda parte de la tesis se estudia la participación de la enzima hemo oxigenasa-1 (HO-1) en la regulación de la AR. En estudios realizados previamente, analizamos la implicación del factor de transcripción Nrf2 que regula la expresión de esta enzima y que además codifica para una serie de genes con propiedades protectoras, antiinflamatorias y antioxidantes. Este factor de transcripción actúa en la patogénesis de la AR controlando y paliando el desarrollo y gravedad de la misma. La enzima HO-1 es una de las principales enzimas reguladas por Nrf2 y su función es catalizar la degradación oxidativa del grupo hemo, potencialmente tóxico. Además, productos de esta reacción como biliverdina, bilirrubina y monóxido de carbono (CO), pueden tener propiedades citoprotectoras, antioxidantes y antiinflamatorias. A la vista de estos resultados previos, decidimos centrar este estudio en el papel de HO-1 en la fase efectora de la artritis experimental. Para ello, trabajamos con el modelo clásico de artritis experimental por transferencia de suero K/BxN. Los animales utilizados fueron ratones Knockout (KO) para la enzima HO-1 (HO-1-/-), y ratones heterocigóticos (HO-1+/-) que sí expresaban HO-1 pero únicamente en uno de sus alelos. En contra de la idea inicial, los ratones que mostraban mayor severidad en la patogenia de la artritis a nivel macroscópico fueron los ratones heterocigóticos y el estudio histológico confirmó estos datos. La heterocigosis provocó una intensa respuesta inflamatoria articular que estaría relacionada con un aumento de los niveles de CXCL-1 y de la migración leucocitaria, mientras que la homocigosis determinó una mayor respuesta inflamatoria sistémica. Continuamos los estudios sobre la actividad de esta enzima en células mieloides. Para ello utilizamos ratones KO condicionales (HO-1KO-M) incapaces de expresar HO-1 pero únicamente en las células de la línea mieloide. Para realizar un primer estudio de la implicación de HO-1 en el proceso inflamatorio mediado por dichas células, trabajamos con un modelo sencillo de inflamación aguda. El modelo utilizado es el conocido como “bolsa de aire en ratón” que está basado en la formación de una cavidad subcutánea en el dorso del animal tras la inyección de aire estéril. En la “bolsa” generada se pueden inyectar diferentes agentes irritantes que en nuestro caso, nos permiten estudiar la influencia de HO-1 en la producción de mediadores en el proceso inflamatorio. En los resultados obtenidos, pudimos comprobar que los ratones HO-1KO-M mostraban niveles más elevados de migración leucocitaria y de los mediadores inflamatorios principales (IL-1β, TNFα, MMP-3, PGE2). Una vez comprobada la implicación de HO-1 mieloide en la regulación de un proceso inflamatorio agudo, estudiamos la influencia de esta deleción en la línea mieloide en el modelo de artritis por transferencia de suero K/BxN, donde la regulación de la inflamación depende de la influencia de una gran variedad de factores, ya que están implicados más mecanismos. Con este objetivo, desarrollamos el modelo artrítico K/BxN en los ratones HO-1KO-M. El resultado fue una artritis caracterizada por un aumento en la osteoclastogénesis y en la formación de osteofitos en los ratones HO-1KO-M.	es_ES
dc.format.extent	226 p.	es_ES
dc.language.iso	es	es_ES
dc.subject	Artritis reumatoide	es_ES
dc.subject	Hemo oxigenasa-1	es_ES
dc.subject	Modelo de artritis por transferencia de suero de ratones K/BxN	es_ES
dc.subject	Ratones Knockout	es_ES
dc.subject	Ratones condicionales en HO-1 en las células procedentes de la línea mieloide	es_ES
dc.title	Papel de hemo oxigensa-1 en la artritis inducida por transferencia de suero K/BxN. Caracterización del modelo experimental	es_ES
dc.type	doctoral thesis	es_ES
dc.subject.unesco	UNESCO::CIENCIAS MÉDICAS	es_ES
dc.embargo.terms	0 days	es_ES