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dc.contributor.advisor | Braco Soler, Lorenzo | |
dc.contributor.advisor | Abad Mazario, Concepción | |
dc.contributor.author | Mingarro Muñoz, Ismael | |
dc.contributor.other | Departament de Bioquímica i Biologia Molecular | es_ES |
dc.date.accessioned | 2018-04-16T10:44:14Z | |
dc.date.available | 2018-04-17T04:45:05Z | |
dc.date.issued | 1994 | es_ES |
dc.date.submitted | 12-09-1994 | es_ES |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10550/65682 | |
dc.description.abstract | En primer lugar, en esta Tesis se ha explorado por primera vez, de una forma sistemática, el comportamiento de la fosfolipasa A2 de pancreas porcino (ppPLA2) en medios orgánicos monofásicos con bajo contenido en agua. Se ha investigado como pueden modular las actividades tanto desacilante como acilante de la enzima un número determinado de variables, encontrándose que: (i) la ppPLA2 es severamente inhibida por moderadas concentraciones de fosfolípidos sustrato y producto, lo que tiene implicaciones importantes, particularmente concernientes a su actividad sintética; (ii) la enzima exhibe una notable alteración de su selectividad hacia la cabeza polar de los sustratos con relación a la que muestra en los medios acuosos; y (iii) la ppPLA2 presenta una discriminación exquisita entre ácidos grasos de distinta longitud de cadena y grado de insaturación cuando los esterifica con LPC. Además, estos resultados se han utilizado para optimizar la eficacia sintética de la enzima en medio no acuoso obteniéndose un incremento del rendimiento en la síntesis de PC de cerca de treinta veces con respecto a los datos aportados previamente por otros grupos. En segundo lugar, se ha desarrollado una estrategia innovadora, que denominamos impresión molecular de enzimas lipolíticas basada en activación interfacial (IMAI), para la optimización racional de estas enzimas en medios no acuosos. Esta estrategia explota de forma combinada (i) la conocida exaltación de la rigidez conformacional de las proteínas en medios anhidros y (ii) los cambios conformacionales, en términos de incremento de la accesibilidad de sustrato y de inducción de una red catalítica más competente, asociados a la activación de la enzima en las interfases lípido/agua, para generar formas manejables y activadas (atrapadas cinéticamente) de las enzimas lipolíticas. Los resultados obtenidos con diferentes lipasas, racionalizados en base a su conocimiento estructural actual, muestran que la IMAI representa un método sencillo y versátil para producir biocatalizadores notablemente más eficientes, que pueden llegar a generar potenciaciones de la velocidad enzimática de hasta dos órdenes de magnitud. Además, la aplicación de esta estrategia puede producir un considerable beneficio práctico teniendo en cuenta la gran profusión del uso de lipasas en aplicaciones biotecnológicas. | es_ES |
dc.format.extent | 92 p. | es_ES |
dc.language.iso | es | es_ES |
dc.title | Caracterización y activación de enzimas lipolíticas en medios no acuosos | es_ES |
dc.type | doctoral thesis | es_ES |
dc.embargo.terms | 0 days | es_ES |