El neuroblastoma es el tumor sólido extracraneal más común en la niñez con un índice de supervivencia a los cinco años del 40% en pacientes de riesgo elevado a pesar de terapias intensivas. Recientemente, aunque la inmunoterapia, incluida la terapia de células T con receptor de antígeno quimérico, representa un tratamiento revolucionario para las neoplasias hematológicas, sigue habiendo grandes desafíos para aplicar esta estrategia terapéutica con los tumores sólidos, incluido el neuroblastoma, como resultado de la naturaleza inmunosupresiva del microambiente tumoral. Se ha descrito que las células cancerosas desarrollan múltiples mecanismos para escapar del reconocimiento inmune o para modular la función de las células inmunes. De hecho, varios subtipos de células inmunitarias que infiltran los tumores pueden fomentar el desarrollo de tumores, albergar actividad inmunosupresora y/o disminuir la eficacia de la inmunoterapia. Cuantificar los diferentes tipos celulares inmunes existentes en el microambiente tumoral del neuroblastoma, mediante técnicas morfométricas semiautomáticas validadas, ayudaría a mejorar la estratificación pretratamiento de riesgo a recaída y/o muerte de los pacientes, así como para avanzar en el conocimiento de la inmunoterapia adecuada a aplicar de manera precisa y personalizada. Con esta finalidad, hemos construido 33 micromatrices de tejido que incluyeron 618 tumores neuroblásticos, que fueron inmunoteñidos con los marcadores anti-CD4, de linfocitos T colaboradores; anti-CD7, de linfocitos T inmaduros; anti-CD8, de linfocitos T citotóxicos; anti-CD20, de linfocitos B; anti-CD11b, de células supresoras; anti-CD11c, de células dendríticas; anti-CD45, marcador general de leucocitos; anti-CD68, de macrófagos asociados a tumor; y anti-CD163 de macrófagos asociados a tumor tipo M2. Las laminillas inmunoteñidas fueron digitalizadas con un escáner de preparaciones y las imágenes generadas fueron analizadas con distintos algoritmos de análisis de imagen automatizado que permitieron detectar y caracterizar la cantidad de elementos y su intensidad de tinción. Un patólogo analizó el 60% de los casos con el sistema tradicional de contaje, con el fin de validar las herramientas digitales. Los resultados de la cuantificación se relacionaron con la supervivencia y el pronóstico de los pacientes, así como con los distintos subgrupos de neuroblastoma, teniendo en cuenta sus características clínicas, histopatológicas y genéticas. Los resultados obtenidos que mostraron una gran correlación entre el análisis digital y el análisis visual al microscopio óptico y las propuestas de avance en el ámbito técnico realizadas, permiten resaltar las siguientes conclusiones: 1) asociando la cantidad y tipo de infiltrado inmune mediante análisis de imagen microscópico se mejora la estratificación terapéutica de riesgo de los pacientes afectos de neuroblastoma. El modelo propuesto de reclasificación terapéutica, incluyendo como marcador de mal pronóstico la detección de una baja infiltración de células CD11c+, junto con una alta infiltración de células CD68+ en las muestras tumorales permitiría aplicar junto con las terapias actuales, una inmunoterapia específica que implicara al infiltrado de dichas células orientada a disminuir el elevado riesgo de muerte y la merma del tiempo de supervivencia global y libre de eventos asociados a dicha infiltración. 2) Las características clinicobiológicas del estadio, estatus de MYCN y 11q en neuroblastoma agresivo definen un subgrupo de pacientes en el que el tiempo de supervivencia global se acorta si sus tumores presentan la combinación de infiltrado de macrófagos CD68ALTA y CD163ALTA. La morfología de las células macrofágicas CD163+ también debe ser tomada en consideración. 3) El infiltrado inmune de nuestra cohorte de linfocitos CD8+, CD4+ o CD7+, de células supresoras CD11b+ o de células CD45+, dependiendo de los factores clinicobiológicos individuales con valor pronóstico, puede ser útil para definir subgrupos de pacientes con respuestas a la inmunoterapia distinta. Con este estudio demostramos la importancia de cuantificar y tipificar la presencia de células del sistema inmune en los tumores neuroblásticos, mediante técnicas de análisis de imagen, para poder ser usada en la mejora de la estratificación de pacientes con neuroblastoma agresivo y para establecer las nuevas estrategias inmunoterapéuticas.