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Estudio de las mucinas ancladas a membrana como diana farmacológica en la fibrosis pulmonar

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Estudio de las mucinas ancladas a membrana como diana farmacológica en la fibrosis pulmonar

dc.contributor.advisor	Cortijo Gimeno, Julio
dc.contributor.advisor	Milara Payá, Javier
dc.contributor.advisor	Camps Herrero, Carlos
dc.contributor.author	Safont Aguilera, María José
dc.contributor.other	Departament de Farmacologia	es_ES
dc.date.accessioned	2021-01-18T08:41:38Z
dc.date.available	2021-02-18T05:45:05Z
dc.date.issued	2020	es_ES
dc.date.submitted	19-01-2021	es_ES
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10550/77210
dc.description.abstract	Antecedentes: La fibrosis pulmonar idiopática (FPI) es una enfermedad pulmonar intersticial fibrosante y crónica de etiología desconocida e incurable englobada dentro de las enfermedades raras. Varias mucinas han demostrados estar implicadas en esta enfermedad, sin embargo, no hay evidencia hasta la fecha sobre el papel de la mucina anclada a membrana MUC4 en el desarrollo de FPI. Objetivo: Evaluar la sobreexpresión y localización de MUC4 en el tejido pulmonar de pacientes con FPI asi como caracterizar su posible implicación en la activación y transformaciones celulares que participan en la FPI (proliferación de fibroblastos, senescencia, transición epitelio mesénquima y transición fibroblasto mesénquima), así como los aspectos funcionales característicos como base preclínica y traslacional de futuros tratamientos. Métodos y resultados: la expresión de MUC4 aumentó en el tejido pulmonar de pacientes con FPI (n = 22) en comparación con el de los sujetos sanos (n = 21) y se localizó en arterias pulmonares, células epiteliales bronquiales basales, fibroblastos de la submucosa y células alveolares hiperplásicas de tipo II. TGF-B1 promovió las transformaciones mesenquimatosas / miofibroblásticas aumentando la expresión de colágeno tipo I, Snail, Slug y actina de músculo liso alfa, en células alveolares tipo II (A549) y fibroblastos de pulmón humano (MRC5), y disminuyó el marcador de células epiteliales E-cadherina en las células A549. La disminución de la expresión de MUC4 usando siRNA-MUC4 inhibió las transformaciones tanto de epitelio a mesénquima (TEM) con de fibroblasto a miofibroblasto /características de esta enfermedad de forma estadísticamente significativa,así como la senescencia celular y la proliferación de fibroblastos inducida por TGFB-1. La sobreexpresión de MUC4 en las células HEK293 transfectadas con un sistema de expresión génica de MUC4 inducible con doxiciclina, aumentó los efectos de TGFB-1 sobre las transformaciones mesenquimales / miofibroblastos y la senescencia celular. La sobreexpresión de MUC4 y el silenciamiento del gen siRNA-MUC4 aumentaron o disminuyeron respectivamente la fosforilación de TGFB-RI y SMAD3 contribuyendo a la activación del elemento de unión de smad a nivel del núcleo, que regula las respuestas transcripcionales que inducen los diferentes procesos implicados en la FPI. El análisis de inmunoprecipitación y la inmunofluorescencia cofocal mostraron la formación de un complejo proteico entre MUC4B / p-TGFB-RI y tambien con SMAD3 fosforilado en la membrana celular después de la estimulación con TGFB-1 y en el tejido pulmonar de pacientes con FPI. La fibrosis pulmonar inducida por bleomicina y la mortalidad secundaria se redujo en ratones transfectados transitoriamente con siRNA-MUC4. También se observó una menor afectación de la función pulmonar medida por pletismografía de cuerpo entero en los ratones transfectados transitoriamente con siRNA-MUC4 y una menor respuesta inflamatoria que en los ratones no silenciados y tratados con bleomicina. La administración de bleomicina en los ratones nativos produjo un aumento de la expresión génica del ARN de marcadores fibróticos reconocidos como colágeno tipo I, TGFB1, CRGF, IL-13, MUC5B y marcadores fibróticos oxidativos NOX4 y NRF-2, siendo esta elevación significativamente menor en los ratones con silenciamiento de MUC4. De la misma manera que el tejido pulmonar humano estudiamos la colocalización de MUC4 con TGFB-R1 fosforilado y SMAD3 fosforilado mediante microscopía cofocal. En los ratones control con fibrosis inducida por bleomicina observamos una distribución citoplasmática y cofocal de ambos complejos proteicos siendo este fenómeno prácticamente indetectable en los ratones con MU$ silenciado y en los ratones control no tratados con bleomicina. Conclusiones: la expresión de MUC4 aumenta en la FPI y promueve procesos fibróticos en colaboración con la vía canónica de TGFB-1 que podría ser un objetivo farmacológico atractivo para el tratamiento de la FPI humana.	es_ES
dc.format.extent	153 p.	es_ES
dc.language.iso	es	es_ES
dc.subject	fibrosis pulmonar	es_ES
dc.subject	mucina 4	es_ES
dc.subject	factor de crecimiento transformante tipo 1	es_ES
dc.title	Estudio de las mucinas ancladas a membrana como diana farmacológica en la fibrosis pulmonar	es_ES
dc.type	doctoral thesis	es_ES
dc.subject.unesco	UNESCO::CIENCIAS MÉDICAS ::Farmacología ::Análisis de medicamentos	es_ES
dc.embargo.terms	1 month	es_ES