La hipoxia fetal crónica es causa de muchas anomalías neurocognitivas con grave repercusión en el adulto. Muchas de las enfermedades tienen su origen en una hipoxia fetal no diagnosticada durante la gestación. En la actualidad no existe ninguna técnica precisa para distinguir que fetos están sufriendo hipoxia al final de la gestación. El Doppler y la valoración del crecimiento fetal solo permiten sospechar la existencia de daño hipóxico crónico, cuando el daño neurológico ya se ha establecido. La capacidad de detectar dichas anomalías con técnicas de biología molecular de marcadores biológicos sería un instrumento de enorme valor para la prevención del daño perinatal. Este proyecto de investigación se encaminó a la detección de marcadores biológicos (micro-RNA) de daño neurológico fetal en sangre materna. Para ello, se estudiaron muestras sanguíneas de cordón umbilical y sangre materna, obtenidas tras el parto, pertenecientes a dos grupos de población de estudio: gestaciones con restricción de crecimiento tardío (RCF) y gestaciones con crecimiento normal. En primer lugar se realizó un proceso de secuenciación genética en 25 muestras (16 crecimiento normal / 9 RCF-tardío) de sangre de cordón umbilical para valorar los micro-RNAs (miRNAs) que se expresaban de forma diferenciada. Con posterioridad, éstos resultados se validaron mediante técnica PCR en 48 muestras (24 crecimiento normal/ 24RCF tardío). Al analizar los resultados de la validación se observó una sobreexpresión significativa en el grupo de RCF tardío de los miRNAs: miRNA-25-3p, miRNA-132-3p y miRNA-185-5p. Una vez obtenidos estos resultados se llevó a cabo un análisis de las vías y la ontología génica, relacionadas con RCF descriptas en la literatura, en la que están implicados estos miRNAs, las cuales revelaron una sobrerrepresentación principalmente de ciertas vías moleculares asociadas al desarrollo cardiaco, angiogénesis y muerte neuronal. Además, como novedoso hallamos miRNAs con acción sinérgica (miR-185-5p y miR-25-3p) en el metabolismo de colesterol, de gran importancia en el desarrollo fetal. Por otro lado también se realizó una asociación de estos miRNAs con parámetros clínicos y ecográficos, de manera que nos permitiera poder utilizarlos en algoritmos pronóstico/terapéuticos. La mayoría de los casos con sobreexpresión de miR-132-3p presentaron centiles de peso corporal bajos; la sobreexpresión de miR-185-5p está inversamente correlacionada con el Doppler fetal (CPR MoM), por lo que su papel fundamental estaría relacionado con la respuesta a la hipoxia. A continuación se realizó la búsqueda de éstos miRNAs en las muestras de sangre materna pareadas con las del cordón umbilical analizadas previamente, en la no se encontró el perfil diferencial observado en sangre fetal, por lo que, al menos en nuestro estudio concluimos que éstos miRNAs no se transmiten significativamente a través de la placenta y que esto podría deberse, entre otras hipótesis, a que la disfunción placentaria en la RCF podría atenuar la biogénesis de miRNAs, y su posterior liberación al plasma y/o que los patrones de expresión de los miRNAs difieren para tejidos específicos. Ante estos resultados y teniendo en cuenta que la sobreexpresión de miRNAs hallada en sangre de cordón umbilical no es reproducible intraútero en la práctica clínica, concluimos que la investigación futura debería centrarse en los perfiles de miRNAs en sangre materna directamente. No obstante, nuestro trabajo ha permitido no solo poner en evidencia los cambios moleculares que se producen en la restricción de crecimiento tardía sino también comprender de qué manera muchas de las afecciones del adulto tienen su origen en la vida intrauterina.

Chronic fetal hypoxia is the cause of many neurocognitive abnormalities with serious repercussions in the adult. Many of the diseases have their origin in undiagnosed fetal hypoxia during gestation. At present there is no precise technique to distinguish which fetuses are suffering from hypoxia at the end of gestation. Doppler and fetal growth assessment only allow suspicion of chronic hypoxic damage when neurological damage has already been established. The ability to detect such abnormalities with molecular biology biomarker techniques would be an enormously valuable tool for the prevention of perinatal damage. This research project aimed to detect biomarkers (micro-RNA) of fetal neurological damage in maternal blood. For this purpose, blood samples of umbilical cord and maternal blood, obtained after delivery, belonging to two study population groups were studied: gestations with late growth restriction (FGR) and gestations with normal growth. First, a genetic sequencing process was carried out on 25 samples (16 normal growth / 9 FGR-late growth) of umbilical cord blood to assess the micro-RNAs (miRNAs) that were differentially expressed. Subsequently, these results were validated by PCR technique in 48 samples (24 normal growth/ 24 late FGR).Upon analysis of the validation results, significant overexpression was observed in the late RCF group of miRNAs: miRNA-25-3p, miRNA-132-3p and miRNA-185-5p. Once these results were obtained, an analysis of the pathways and gene ontology related to RCF described in the literature in which these miRNAs are involved was carried out, which revealed an overrepresentation mainly of certain molecular pathways associated with cardiac development, angiogenesis and neuronal death. In addition, as a novelty, we found miRNAs with synergistic action (miR-185-5p and miR-25-3p) in cholesterol metabolism, of great importance in fetal development. On the other hand, we also performed an association of these miRNAs with clinical and ultrasound parameters, so that we could use them in prognostic/therapeutic algorithms. Most of the cases with miR-132-3p overexpression presented low body weight centiles; miR-185-5p overexpression is inversely correlated with fetal Doppler (CPR MoM), so its fundamental role would be related to the response to hypoxia. We then searched for these miRNAs in the maternal blood samples paired with those of the umbilical cord previously analyzed, and did not find the differential profile observed in fetal blood, so that, at least in our study, we conclude that these miRNAs are not significantly transmitted through the placenta and that they are not significantly transmitted through the umbilical cord. This could be due, among other hypotheses, to the fact that placental dysfunction in FCR could attenuate miRNA biogenesis and their subsequent release into the plasma and/or that miRNA expression patterns differ for specific tissues. Given these results and considering that the overexpression of miRNAs found in cord blood is not reproducible intrautero in clinical practice, we conclude that future research should focus on miRNA profiles in maternal blood directly. Nevertheless, our work has allowed us not only to highlight the molecular changes that occur in late growth restriction but also to understand how many of the adult conditions have their origin in intrauterine life.